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      淺析凍存ATCC細胞的復蘇和培養

      時間:2020-03-27 點擊次數:1132
         淺析凍存ATCC細胞的復蘇和培養
        在操作凍存的ATCC細胞株時使用手套,工作服和防護面具以避免任何事故發生。
        檢查包裝,查看是否有任何破裂或滲漏。凍存的ATCC細胞株應處于固體狀。
        將凍存的ATCC細胞株從有干冰的包裝中取出,立即復蘇培養,或迅速轉移放置在液氮罐氣象層在-130℃以下的溫度存儲。
        凍存細胞的復蘇和培養
        1、先準備好細胞培養皿或細胞培養瓶,及產品說明書推薦的相應細胞培養基。并在37℃水浴中預先溫熱細胞培養基。(請參閱:*注1)
        2、小心取出裝有細胞的凍存管,保持管蓋擰緊,將凍存管蓋以下的部分置于37℃水浴中并輕微的攪拌以幫助解凍。解凍過程應該盡快,大約短于2分鐘或待后一塊小冰晶體剛融化,就應將細胞凍存管取出水浴。
        3、在從水浴中取出的細胞凍存管表面噴灑70%乙醇配制的消毒劑,用無菌紙巾或紗布試干。之后的操作步驟都應該遵循在無菌條件下生物安全柜中嚴格操作。
        4、小心擰開凍存管的頂部,將管內容物用1ml移液槍轉移到含9ml培養基的無菌離心管中。離心5到7分鐘(125×g),小心吸去上清液以去除抗凍劑(DMSO),避免丟失細胞沉淀。將細胞沉淀重懸于配好的*培養基中。將細胞懸液轉移到培養容器,輕輕搖晃使細胞均勻的分布。生長較慢的細胞株可重懸于5-8ml培養基并轉移到T25培養瓶。生長較快的細胞株可重懸于12-20ml培養基并轉移到T75培養瓶。ATCC網站有各個細胞株的具體生長狀況及培養方法記載。
        5、將細胞培養容器置于細胞培養箱,在溫度37℃,二氧化碳濃度5%的培養條件下進行孵育。細胞培養24小時后應在顯微鏡下觀察細胞形態和生長狀況。(請參閱:*注2)
        *注1:雖然大多數細胞株可以在一種以上的培養基中生長,但細胞的特征有可能會在更換不同種培養基時發生。為保證*效果,請從細胞培養一開始就使用ATCC推薦的培養基。
        *注2:某些ATCC細胞株,如雜交瘤株,可能需要幾天的時間才從凍存狀態下*恢復正常生長。在細胞復蘇培養di一天可能會呈現較低的細胞活力并產生一些細胞碎片。度過這一時期后,細胞會恢復并進入指數增長期。
        細胞培養貼士
        細胞株的生長有兩種狀態,貼壁細胞需要附著在一個表面進行生長(貼壁依賴性),懸浮細胞可在懸浮培養狀態下生長(非貼壁依賴)。在細胞單層貼壁生長或懸浮生長中,都通常遵循四個特征性階段:遲滯期、對數或指數期、靜止或平臺期及衰退期。
        遲滯期—細胞在剛接種于細胞培養容器的初期呈現生長緩慢,細胞正從解凍或傳代后慢慢恢復活力。
        對數或指數期—細胞進入一個持續快速增長的時期,呈指數級增長,直至貼壁細胞占滿整個培養容器表面或懸浮細胞的濃度超過細胞培養基的供給能力。
        靜止/平臺期—細胞增殖減慢和停止。
        衰退期—如果不更換培養基和進行細胞傳代處理,細胞會失去活力,數量不斷減少。
        為了確保細胞活力、遺傳基因型穩定和表型的穩定,細胞株的培養需要保持在對數期。這意味著需要定期對細胞進行傳代。并且注意在細胞進入生長平臺期之前,即單層細胞100%匯合長滿前或懸浮細胞達到其推薦的大細胞密度之前,要進行細胞傳代。監測細胞生長和繪制每個細胞株的生長曲線都有助于確定細胞株的生長特性。美國ATCC細胞株的詳細信息及培養方法都可以在ATCC*網站上相應的產品網頁中找到。ATCC細胞株產品附帶的各細胞株產品資料單也有說明。

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